ЛАБОРАТОРИЯ ПРЕНАТАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ
Организована в 1986 году.
РУКОВОДИТЕЛЬ: д.б.н., профессор, врач-лаборант–генетик высшей категории Татьяна Владимировна Золотухина
СОСТАВ ЛАБОРАТОРИИ:
Шилова Надежда Владимировна – в.н.с., к.м.н., врач-лаборант-генетик высшей категории
Маркова Жанна Геннадьевна – с.н.с., к.б.н.
Козлова Юлия Олеговна – н.с.
Малютина Анна Валерьевна – лаборант-исследователь
Миньженкова Марина Евгеньевна – ординатор
Основным направлением научной и практической деятельности лаборатории является разработка научных подходов и внедрение в практику новых методов дородовой диагностики наиболее частой врожденной и наследственной патологии – хромосомных нарушений и пороков развития у плода.
Научная деятельность
1. В лаборатории ведутся научные исследования, направленные на оптимизацию формирования среди беременных «групп риска» по рождению детей с хромосомной патологией (в первую очередь – с синдромом Дауна) для последующего проведения диагностических (инвазивных) процедур.
На основании собранной собственной базы данных по понедельным уровням сывороточных маркеров в I-м и во II-м триместрах беременности (АФП, ХГЧ, РАРР-А и free-β-ХГЧ), а также данных УЗИ плода, срока беременности, возраста и веса беременных женщин, коллективом лаборатории создана и успешно внедряется в практическое здравоохранение компьютерная программа «ПРОГНОЗ» для расчета комбинированного риска хромосомной патологии у плода (в первую очередь – синдрома Дауна). Для измерения уровней этих сывороточных маркеров используются тест-системы DELFIA (Wallac, PercinElmer). Программа «ПРОГНОЗ» защищена Авторским свидетельством и Сертификатом соответствия. Особенностью программы «ПРОГНОЗ» является возможность расчета комбинированного риска (с учетом УЗИ плода) как в I-м, так и во II-м триместре беременности.
Использование программы «ПРОГНОЗ» при неинвазивном обследовании женщин позволяет рассчитывать индивидуальный риск с использованием комбинации скрининг-тестов и аргументировано выносить рекомендацию о целесообразности инвазивной процедуры и цитогенетического пренатального исследования плода.
2. Потенциальным неинвазивным подходом для генетического исследования плода является анализ клеток, свободно-клеточной ДНК и РНК плода, присутствующих в крови беременных женщин. Различными современными методами высокой технологии с применением иммуноферментных, молекулярных и молекулярно-цитогенетических методов выделяются, анализируются клетки и фрагменты ДНК и РНК плодного происхождения. Методом количественной ПЦР со специфическими праймерами проводится цикл исследований по определению концентрации и специфических особенностей локусов ДНК хромосомы Y (плодного происхождения) в сыворотке беременных женщин в норме и при патологической беременности.
3. Исследуются молекулы мРНК гена PLAC4, транскрибируемого с хромосомы 21, экспрессия которого специфична для клеток плода (плаценты), что позволяет исключить влияние материнских мРНК, присутствующих в плазме женщин во время беременности. Для сравнения концентраций мРНК, транскрибируемых с материнской и отцовской хромосом, используется количественный анализ панели 5-7 однонуклеотидных полиморфных маркеров (SNP). Он позволит разделить аллели, наследуемые от родителей, и определить соотношение их концентраций, которое теоретически равно 1:1 в норме и 1:2 или 2:1 у носителей трисомий. Внеклеточная мРНК выделяется из плазмы крови беременных женщин в первом и втором триместрах при беременности здоровым плодом и плодом с трисомией-21. С помощью ПЦР с обратной транскрипцией амплифицируются участки выбранного гена, содержащие внутри себя полиморфные маркеры, после чего их аллели анализируются в реакции удлинения праймеров с последующим определением продуктов на масс-спектрометре по методу MALDI-TOF. Количественная оценка интенсивностей пиков, соответствующих материнским и отцовским аллелям, проводится с использованием программного обеспечения Bruker Daltonics. Предполагается, что по результатам исследования будут определены интервалы значений концентраций аллелей, необходимые для однозначного заключения о наличии или отсутствии трисомии хромосомы 21 у плода.
4. Большое значение в исследовательской и клинической работе приобретает молекулярно-цитогенетический метод диагностики хромосомных аберраций – FISH- метод c соответствующими ДНК-пробами на цельные хромосомы или на их отдельные локусы. Этот метод обеспечивает высокую чувствительность при выявлении «скрытых» хромосомных перестроек, неразличимых при анализе в световом микроскопе, установлении точек разрывов, а также низкоуровневого мозаицизма. Идентификация микро-перестроек с уточнением точек разрыва позволяет конкретизировать диагноз и помочь при медико-генетическом консультировании семьи.
Использующийся в работе лаборатории метод мультиплексной mFISH в сочетании с автоматизированным анализом изображения позволяет идентифицировать каждую из 24 различных хромосом человека в одной реакции.
Высокая разрешающая способность автоматизированной системы для анализа mFISH и mBAND (Isis, MetaSystems) позволяет оптимизировать, ускорить исследование и получать результат с высокой степенью достоверности. Система обеспечивает высокое качество захвата цветного изображения, его обработки и документирования.
Использование системы Isis при проведении научных и клинических исследований позволяет не только диагностировать сложные комплексные хромосомные перестройки, идентифицировать маркерные хромосомы, но и открывает возможности исследования корреляции структурных особенностей хромосом с фенотипом пробанда.
По различным аспектам пренатальной диагностики в лаборатории были подготовлены и защищены 1 докторская диссертация и 7 кандидатских.
Сотрудниками лаборатории опубликовано в отечественных и зарубежных научных изданиях более 160 публикаций в виде статей, глав монографий, методических рекомендаций и тезисов. Сотрудники лаборатории многократно представляли результаты своих работ на отечественных и зарубежных генетических форумах. Ведущие сотрудники лаборатории по аспектам своих исследований читают лекции курсантам циклов на кафедре медицинской генетики РМАПО.
ОСНОВНЫЕ ПУБЛИКАЦИИ в 2005-2009 гг.:
1. Zolotukhina T, Shilova N, Voskoboeva E. Analysis of cell-free fetal DNA in plasma and serum of pregnant women // J Histochem a Cytochem. – 2005. – Vol.53, № 2. – P.297–299.
2. Маркова Ж.Г., Мирошникова И.В., Евдокименков В.Н., Гагарина Е.В., Золотухина Т.В. Программа расчета комбинированного риска синдрома Дауна у плода // Медицинская генетика. – 2007. – Т.6, № 2 (56). – С. 38–44.
3. Мирошникова И.В., Маркова И.В., Золотухина Т.В. - Современные стратегии неинвазивных пренатальных скринингов // Медицинская генетика. – 2007. – Т. 6, №3 (57). – С. 11–14.
4. Золотухина Т.В. - Пренатальная диагностика вчера, сегодня, завтра // Медицинская генетика. – 2007. – Т.6, №10 (64), – С. 17–20.
5. Шилова Н. В., Золотухина Т.В. Интерфазная флуоресценция in situ гибридизация (FISH) в диагностике численных хромосомных аберраций // Медицинская генетика. – 2007. –Т.6, № 10 (64). – С. 53–57.
6. Мирошникова И.В., Маркова Ж.Г., Шилова Н.В., Золотухина Т.В. - Анализ совместного использования результатов неинвазивного скрининга, полученных в первом и во втором триместрах беременности. В Сб. «Генетика человека и патология». Под ред. В.П.Пузырева. Вып.8. Томск.:Печатная мануфактура. 2007. – С. 281–284.
7. Шилова Н.В., Ермакова М.А., Золотухина Т.В. - Выявление и идентификация клеток плода в плазме беременных женщин. В Сб. «Генетика человека и патология». Под ред. В.П.Пузырева. Вып.8. Томск.: Печатная мануфактура. 2007. – С. 290–294
8. Chernykh V.B., Vyatkina S.V., Antonenko V.G., Shilova N.V., Zolotukhina T.V., Kurilo L.F., Chukhrova A.L., Polyakov A.V. Unique mosaic X;Y translocation/inversion in infant 45,X male // Am J Med Genet A. – 2008. – V 146A., Iss.24. – P. 3195–3197.
9. Шилова Н.В., Черных В.Б., Цветкова Т.Г., Галкина В.А., Осипова Е.В., Мошкова М.Ю., Поляков А.В., Золотухина Т.В. Комплексный подход в диагностике уникальной аутосомно-гоносомной перестройки // Медицинская генетика. – 2009. – №2. – С.44–47.
Контакты: 115478, г.Москва, ул. Москворечье, д.1
Тел: 8-499-612-80-40
|
